Bakteriální spřažení transkripce-translace
V prokaryotické buňce mohou RNA polymerázy (RNAP) a volné ribozomální podjednotky prozkoumat celý nukleoid (dolní levý panel). RNAP začíná přepisovat gen v nukleoidu a první ribozom se váže na vznikající RNA. Jak polyribozomální struktury rostou, spřažený transkripčně-translační aparát se možná přesouvá na periferii nukleoidu (pravý spodní panel).
Používáme časově rozlišenou kryo-elektronovou mikroskopii (kryo-EM) k určení struktur s vysokým rozlišením in vitro RNAP-ribozomových komplexů ve více stavech spřažené transkripce-translace: od iniciace translace po elongaci. Struktury in vitro komplexů budou porovnány s in vivo komplexy vizualizovanými kryo-elektronovou tomografií (kryo-ET) v blízkém nukleoidovém prostoru.
Virové spřažení transkripce-translace v savčích buňkách
Zjednodušený diagram spojení transkripce-translace v infikované savčí buňce cytoplazmatickým virem v pozdních stádiích virové infekce. Transkribované virové mRNA virovými RNAP se koncentrují ve virových továrnách a úzce se spojují s ribozomy, aby se maximalizovala produkce virových proteinů v pozdních stádiích infekce.
Aplikujeme kryo-ET na virově infikované buňky a subtomografické průměrování k vizualizaci virové RNAP a ribozomů v sub-nanometrovém rozlišení. Tím určujeme, zda a jak viry spojují transkripci a translaci ve virových továrnách.
Demo Lab
